BD 產(chǎn)品貨號：354259

儲存和運輸：-20度儲存，干冰運輸。

操作指南：

層粘連蛋白/巢蛋白混合物是EHS小鼠腫瘤基質(zhì)膜的主要成分。純化后，成等摩爾濃度分布。二價陽離子有利于混合物的形成。在2mg/mL濃度時，層粘連蛋白/巢蛋白可以形成三維膠，可用于細胞生長和分化的研究。三維膠更接近體內(nèi)微環(huán)境。細胞的分化受到與單一或混合細胞外基質(zhì)蛋白之間的相互作用的影響，因此在層粘連蛋白/巢蛋白混合物上培養(yǎng)細胞，可以用以觀察并揭示細胞分化和功能性的特性機理?；旌系鞍椎某赡z過程對溫度敏感。此外，高濃度的層粘連蛋白/巢蛋白（2-6mg/mL）也用于人下頜腺泡細胞和內(nèi)皮細胞的血管形成研究。

注意事項：

所有操作的工作溫度不能高于4℃，蛋白需冰上操作保存，用冰塊冷卻的溶液或細胞懸浮液稀釋。由于混合蛋白溶液粘性較高，必須使用預(yù)冷的注射器型移液管，如Gilson M系列；避免使用氣壓式移液管或吸頭。

推薦包被方法：

鋪膠步驟：細胞在膠表面培養(yǎng)

冰上溶解混合蛋白，所有操作均在冰浴上進行。稀釋到需要的濃度：穩(wěn)定成膠濃度至少為3.5mg/mL。用預(yù)冷的等壓鹽溶液或0.1mM鈣離子培養(yǎng)基稀釋。將稀釋的蛋白溶液加入到培養(yǎng)器皿，1-2小時，37℃成膠。

鋪膠步驟：細胞在膠內(nèi)部培養(yǎng)

冰上溶解混合蛋白，所有操作均在冰浴上進行。根據(jù)加樣體積計算并稀釋混合蛋白，成膠濃度至少為3.5mg/mL，稀釋過程需在預(yù)冷的培養(yǎng)器皿或小管中進行。加入預(yù)冷的細胞懸液，用等壓鹽溶液或培養(yǎng)基調(diào)節(jié)溶液濃度到第二步所需的濃度。系列移液管混勻混合蛋白和細胞懸液。將混合后的細胞蛋白懸液加入到預(yù)冷的培養(yǎng)板中，37℃孵育1-2小時成膠。